CD19 EKSİKLİĞİ TANISINDA RFLP YÖNTEMİNİN KULLANIMI

Year 2021, , 365 - 368, 15.12.2021

Hatice Efe Mehmet Karaselek , Hasan Kapaklı , Yahya Gül Sevgi Keleş Şükrü Güner , Ercan Kurar , İsmail Reisli

https://doi.org/10.54005/geneltip.977551

Abstract

B lenfosit yüzeyinde bulunan CD19 molekülü olgun B hücrelerinde CD21, CD81, CD225 ile birlikte CD19 kompleksini oluşturur ve antijen uyarısı ile birlikte B lenfosit aktivasyonunu düzenler. CD19 molekülünü kodlayan gende oluşacak mutasyonlar, CD19 protein ekspresyonunu etkilemekte ve primer immün yetmezlik (PIY) tablosu ortaya çıkmaktadır. Bu çalışmada CD19 eksikliği tanısıyla izlediğimiz hastamızın 3 aylık bebeğinin, RFLP yöntemiyle aynı gen mutasyonu yönünden değerlendirilmesi amaçlanmıştır. Çalışmaya bilinen CD19 mutasyonlu hasta, bu hastanın yeni doğan bebeği ile hastanın annesi ve iki sağlıklı kontrol dahil edilmiştir. Mutasyon analizi için ilk olarak CD19 genindeki mutasyon bölgesini kapsayan primerler dizayn edilip PZR-RFLP işlemi gerçekleştirilmiştir. Oluşan DNA fragmentleri agaroz jel elektoroforezinde görüntülenip genotiplemesi yapılmıştır. Hastamızın CD19 geninin ekzon 6’da saptanan çerçeve kayması mutasyonu (c.973_973insA) yönünden bebeğinin ve annesinin taşıyıcı olduğu PZR-RFLP yöntemi ile gösterilmiştir. PZR-RFLP yönteminin, bilinen mutasyonların belirlenmesinde kullanılabilecek ucuz, hızlı ve güvenilir bir yöntem olduğu kanısındayız.

Keywords

CD19 eksikliği, PİY, PZR-RFLP

Supporting Institution

Necmettin Erbakan Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Koordinatörlüğü

Project Number

182018008

Thanks

Necmettin Erbakan Üniversitesi Bilimsel Araştırma Projeleri Koordinatörlüğü

THE USE OF RFLP METHOD IN THE DIAGNOSIS OF CD19 DEFICIENCY

Abstract

CD19 molecule on the B lymphocyte surface forms the CD19 complex together with CD21, CD81, CD225 in mature B cells and regulates B lymphocyte activation with antigen stimulation. Mutations that will occur in the gene encoding the CD19 molecule affect CD19 protein expression and the picture of primary immunodeficiency (PIY). In this study, we aimed to evaluate the 3-month-old baby of our patient, who was followed up with a diagnosis of CD19 deficiency, in terms of the same gene mutation using the RFLP method. The patient with known CD19 mutation, the newborn baby of this patient and the patient's mother were included in the study. First, primers covering the mutation region in the CD19 gene were designed for mutation analysis and the PCR-RFLP procedure was performed. The DNA fragments formed were imaged and genotyped in agarose gel electrophoresis. In terms of the frame shift mutation (c.973_973insA) of the CD19 gene detected in exon 6 of our patient, it was shown by the PCR-RFLP method that her baby and mother were carriers. It is concluded that the PCR-RFLP method is an inexpensive, fast and reliable method that can be used in the detection of known mutations.

Keywords

CD19 deficiency, PID, PCR-RFLP

Project Number

182018008

References

• 1. Picard C, BobbyGaspar H, Al-Herz W, Bousfiha A, CasanovaJL,ChatilaT,Crow YJ, Cunningham-RundlesC,EtzioniA,FrancoJL, Holland SM,KleinC,MorioT,Ochs HD, OksenhendlerE,PuckJ,TangMLK,TangyeSG,TorgersonTR,SullivanKE.InternationalUnion of Immunological Societies:2017 PrimaryImmunodeficiencyDiseasesCommittee Report on InbornErrors of Immunity.JClin Immunol.2018 Jan;38(1):96-128.
• 2. Ballow M. Primaryimmunodeficiencydisorders:antibodydeficiency. J AllergyClinImmunol 2002;109:581-91.
• 3. Wang K, Wei G, Liu D. CD19: Abiomarkerfor B celldevelopment,lymphomadiagnosisandtherapy.ExpHematolOncol 2012; 29;1(1):36.
• 4. Şekerel BE. Çocukluk Çağında Allerji Astım İmmünoloji.Bilnet Matbaacılık ve Ambalaj A.Ş. 2015;99-126.
• 5. VanZelmMC.Reisli I. Van der Burg M.CastañoD. ve ark.An antibody-deficiencysyndromeduetomutations in the CD19 gene.NEng JMed.2006;354(18):1901-12.
• 6. Reisli İ,ArtaçH,PekcanS,KaraR,YümlüK,KaragölC,ÇimenÖ,ŞenM,ArtaçM.CD19 molekül eksikliği:Bir köy taraması. Tur Arch Ped. 2009;44: 127-30.
• 7. Dib C,Faure S, Fizames C, Samson D, Drouot N, VignalA, ve ark. A comprehensivegeneticmap of thehumangenomebased on 5,264 microsatellites. Nature. 1996;380(6570):152-54.
• 8. Ota M.,Fukushima H., Kulski JK., Inoko H. Singlenucleotidepolymorphismdetectionbypolymerasechainreaction-restrictionfragmentlengthpolymorphism. NatProtocols. 2007;2(11):2857-64.
• 9. Karaselek MA, Kapaklı H, Keleş S, Güner ŞN, Çelik ŞÇ, Kurar E, Reisli İ. Intrauterinedetection of DCLRE1C (Artemis) mutationbyrestrictionfragmentlengthpolymorphism. Pediatr AllergyImmunol. 2019;30(6):668-71.